Phylo-geographic analysis of whitefly on the basis of mitochondrial cytochrome oxidase 1 gene / Análise filogeográfica da mosca-branca com base no gene citocromo oxidase 1 mitocondrial

Bemisia tabaci is a species complex that causes damage to its broad range of plant hosts through serious feeding. It transmits plant viruses of different groups to important agricultural crops. Some important cash crops of Pakistan are sugar cane, rice, tobacco and seed oil. It shows high genetic variability and is differentiated as races or biotypes. Biotypes are, biotype Q, biotype B, biotype B2, biotype M, biotype L, biotype A, biotype H, biotype C, biotype K, biotype N, biotype R, biotype E, biotype P, biotype J, biotype S, biotype AN. Although the current report based on the Bayesian study of mitochondrial cytohrome oxidase gene1 (CO1) DNA sequences has classified the different populations of whiteflies into twelve genetic groups which are Mediterranean, Sub-Saharan Africa silverleafing, Indian Ocean, Asia II, Asia I, Australia, New World, Italy, China, Sub-Saharan Africa non-silverleafing, Mediterranean/Asia Minor/Africa and Uganda sweet potato. Begomoviruses is largest group of viruses transmitted by B. tabaci and cause major diseases of crops such as tomato and chili leaf curl disease, cassava mosaic disease; yellow mosaic disease of legumes and cotton leaf curl disease. The main objective of current study is to inculpate knowledge regarding genetic diversity of whitefly in cotton fields across Pakistan via analysis of partial DNA sequence of mitochondrial gene Cytochrom Oxidase I (mtCO1).

Bemisia tabaci é um complexo de espécies que causa danos a uma ampla gama de hospedeiros vegetais por meio de alimentação séria. Ele transmite vírus de plantas de diferentes grupos para importantes safras agrícolas. Algumas safras comerciais importantes do Paquistão são cana-de-açúcar, arroz, tabaco e óleo de semente. Apresenta alta variabilidade genética e é diferenciado em raças ou biótipos. Os biótipos são: biótipo Q, biótipo B, biótipo B2, biótipo M, biótipo L, biótipo A, biótipo H, biótipo C, biótipo K, biótipo N, biótipo R, biótipo E, biótipo P, biótipo J, biótipo S, biótipo AN . Embora o relatório atual baseado no estudo bayesiano das sequências de DNA do gene 1 da oxidase do citocromo mitocondrial (CO1) tenha classificado as diferentes populações de moscas-brancas em doze grupos genéticos, que são Mediterrâneo, África Subsaariana com folha de prata, Oceano Índico, Ásia II, Ásia I, Austrália, Novo Mundo, Itália, China, África Subsaariana sem folha prateada, Batata-doce Mediterrâneo / Ásia Menor / África e Uganda. Os begomovírus são o maior grupo de vírus transmitidos por B. tabaci e causam as principais doenças de culturas, como a doença do cacho do tomate e da pimenta-malagueta, doença do mosaico da mandioca, doença do mosaico amarelo de leguminosas e doença do enrolamento da folha do algodão. O principal objetivo do presente estudo é inculpar conhecimento sobre a diversidade genética da mosca-branca em campos de algodão em todo o Paquistão por meio da análise da sequência parcial de DNA do gene mitocondrial Citocromo Oxidase I (mtCO1).

Phylo-geographic analysis of whitefly on the basis of mitochondrial cytochrome oxidase 1 gene

Abstract Bemisia tabaci is a species complex that causes damage to its broad range of plant hosts through serious feeding. It transmits plant viruses of different groups to important agricultural crops. Some important cash crops of Pakistan are sugar cane, rice, tobacco and seed oil. It shows high genetic variability and is differentiated as races or biotypes. Biotypes are, biotype Q, biotype B, biotype B2, biotype M, biotype L, biotype A, biotype H, biotype C, biotype K, biotype N, biotype R, biotype E, biotype P, biotype J, biotype S, biotype AN. Although the current report based on the Bayesian study of mitochondrial cytohrome oxidase gene1 (CO1) DNA sequences has classified the different populations of whiteflies into twelve genetic groups which are Mediterranean, Sub-Saharan Africa silverleafing, Indian Ocean, Asia II, Asia I, Australia, New World, Italy, China, Sub-Saharan Africa non-silverleafing, Mediterranean/Asia Minor/Africa and Uganda sweet potato. Begomoviruses is largest group of viruses transmitted by B. tabaci and cause major diseases of crops such as tomato and chili leaf curl disease, cassava mosaic disease; yellow mosaic disease of legumes and cotton leaf curl disease. The main objective of current study is to inculpate knowledge regarding genetic diversity of whitefly in cotton fields across Pakistan via analysis of partial DNA sequence of mitochondrial gene Cytochrom Oxidase I (mtCO1).

Resumo Bemisia tabaci é um complexo de espécies que causa danos a uma ampla gama de hospedeiros vegetais por meio de alimentação séria. Ele transmite vírus de plantas de diferentes grupos para importantes safras agrícolas. Algumas safras comerciais importantes do Paquistão são cana-de-açúcar, arroz, tabaco e óleo de semente. Apresenta alta variabilidade genética e é diferenciado em raças ou biótipos. Os biótipos são: biótipo Q, biótipo B, biótipo B2, biótipo M, biótipo L, biótipo A, biótipo H, biótipo C, biótipo K, biótipo N, biótipo R, biótipo E, biótipo P, biótipo J, biótipo S, biótipo AN . Embora o relatório atual baseado no estudo bayesiano das sequências de DNA do gene 1 da oxidase do citocromo mitocondrial (CO1) tenha classificado as diferentes populações de moscas-brancas em doze grupos genéticos, que são Mediterrâneo, África Subsaariana com folha de prata, Oceano Índico, Ásia II, Ásia I, Austrália, Novo Mundo, Itália, China, África Subsaariana sem folha prateada, Batata-doce Mediterrâneo / Ásia Menor / África e Uganda. Os begomovírus são o maior grupo de vírus transmitidos por B. tabaci e causam as principais doenças de culturas, como a doença do cacho do tomate e da pimenta-malagueta, doença do mosaico da mandioca, doença do mosaico amarelo de leguminosas e doença do enrolamento da folha do algodão. O principal objetivo do presente estudo é inculpar conhecimento sobre a diversidade genética da mosca-branca em campos de algodão em todo o Paquistão por meio da análise da sequência parcial de DNA do gene mitocondrial Citocromo Oxidase I (mtCO1).

Estudo piloto sobre imunomodulação na leishmaniose visceral murina: bloqueio da sinalização de IL-10 e uso de IL-1 / Pilot study on immunomodulation in murine visceral leishmaniasis: blockade of IL-10 signaling and use of IL-12

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecto-parasitária e é considerada negligenciada, segundo a organização mundial de saúde. O cão e o homem fazem parte da manutenção do ciclo da infecção. O crescente aumento de animais infectados acarreta em um problema de saúde pública, pois representa eminente risco de infeção para os humanos. Na LV, a resposta imune celular é suprimida favorecendo a replicação do parasito nos macrófagos e a exacerbação da doença. Estudos apontam que esta supressão pode estar relacionada à secreção da interleucina-10 (IL-10), pois esta tem o papel de regular o excesso de resposta inflamatória, inibindo a produção de IL-12. OBJETIVO: Nesta pesquisa, propõese produzir e purificar plasmídeos codificando receptor de IL-10 e IL-12 murinos, bem como produzir e purificar o receptor de IL-10 murino na forma solúvel no sistema baculovíruscélulas de inseto, visando avaliar os efeitos de substâncias imunomoduladoras em camundongos infectados com Leishmania infantum/chagasi, com o intuito de desenvolver um método imunoterápico para cães com LV. METODOLOGIA: Na primeira parte deste trabalho, camundongos BALB/c foram infectados com L. infantum/chagasi, por via venosa e em seguida foram injetados quatro vezes, com intervalo de 7 dias entre as doses, com salina (G1), pcDNA3.1 (plasmídeo controle) (G2), pcDNA3.1mIL-12 (G3), pcDNA3.1mIL-10R1 (G4) e pcDNA3.1mIL-12+ pcDNA3.1mIL-10R1 (G5), por via intramuscular, seguida de eletroporação. Os efeitos da administração dos plasmídeos foram avaliados através da análise histológica do fígado e baço e pela determinação da carga parasitária do baço por PCR em tempo real. Na segunda parte deste trabalho foi produzida e purificada através do sistema baculovírus-célula de inseto, a proteína rmusIL-10R1. Além disso, foi realizado o ensaio de atividade biológica em células MC/9 para avaliar se a proteína produzida e purificada possui atividade funcional. RESULTADOS: A administração de plasmídeos codificadores do receptor de IL-10R1 em associação com IL-12 seguida de eletroporação apresentou efeitos sistêmicos nos grupos G3 e G5, como presença de granulomas maduros no parênquima hepático e nos espaços portais, intenso infiltrado inflamatório no parênquima hepático, aumento do centro germinativo no tecido esplênico e redução da carga parasitária. O rendimento obtido da proteína produzida e purificada foi de 678 µg por litro de cultivo. CONCLUSÃO: Os efeitos observados na primeira parte do trabalho podem ser atribuídos somente à ação da IL-12 e não do receptor de IL-10. Na segunda etapa do trabalho evidenciou-se que a proteína rmusIL-10R1 não foi capaz de bloquear a sinalização mediada por IL-10 murina

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) is an infectious-parasitic disease and is considered neglected, according to the World Health Organization. The dog and the man are part of maintaining the cycle of infection. The increasing numbers of infected animals have a public health problem, as it represents an imminent risk of infection for humans. In LV, the cellular immune response is suppressed favoring the replication of the parasite in the macrophages and the exacerbation of the disease. Studies indicate that this suppression may be related to the secretion of interleukin-10 (IL-10), since it has the role of regulating the excess inflammatory response, inhibiting the production of IL12. PURPOSE: In this research, it is proposed to produce and purify murine IL-10 and IL-12 receptor encoding plasmids, as well as to produce and purify the murine IL-10 receptor in the soluble form of the baculovirus-insect cells system, in order to evaluate the effects of immunomodulatory substances in mice infected with Leishmania infantum / chagasi, with the aim of developing an immunotherapeutic method for dogs with VL. METHODOLOGY: In the first part of this work, BALB / c mice were infected with venom intravenous L. infantum and then injected four times, with 7 days between doses, with saline (G1), pcDNA3.1 (G2), pcDNA3.1mIL-12 (G3), pcDNA3.1mIL-10R1 (G4) and pcDNA3.1mIL-12 + pcDNA3.1mIL-10R1 (G5), followed by electroporation. The effects of plasmid administration were assessed by histological analysis of the liver and spleen and determination of spleen parasite load by real-time PCR. In the second part of this work the rmusIL-10R1 protein was produced and purified through the baculovirus-insect cell system. In addition, the biological activity assay was performed on MC / 9 cells to assess whether the produced and purified protein has functional activity. RESULTS: Administration of IL-10R1 receptor-encoding plasmids in association with IL-12 followed by electroporation showed systemic effects in the G3 and G5 groups, such as presence of mature granulomas in the hepatic parenchyma and portal spaces, intense inflammatory infiltrate in the hepatic parenchyma , increase of the germinal center in the splenic tissue and reduction of the parasitic load. The yield of the produced and purified protein was 678 µg per liter of culture. CONCLUSION: The effects observed in the first part of the work can be attributed only to the action of IL-12 and not the IL-10 receptor. In the second stage of the work it was shown that the rmusIL-10R1 protein was not able to block murine IL-10 mediated signaling.

Caracterização fenotípica e genotípica de Acinetobacter spp. e Pseudomonas aeruginosa produtores de carbapenemases / Phenotypic and genotypic characterization of carbapenemase-producing Acinetobacter spp. e Pseudomonas aeruginosa

A resistência bacteriana a antibióticos é um grave e crescente problema de saúde pública de âmbito mundial. O principal, e mais eficiente, mecanismo de resistência aos ß-lactâmicos em bacilos Gram-negativos é a produção de ß-lactamases, que possuem a capacidade de hidrolisar o anel ß-lactâmicos e consequentemente inativar essa classe de antibióticos. Vale ressaltar, que atualmente os antibióticos ß-lactâmicos são os mais utilizados clinicamente, particularmente em infecções graves. Dentre as ß-lactamases existentes destacam-se as carbapenemases, enzimas capazes de inativar a maioria dos antibióticos ß-lactâmicos. Uma grande preocupação é o fato dessas enzimas, em sua maioria, serem codificadas por plasmídeos, o que propicia a disseminação desses genes de resistência; portanto, é de extrema importância a realização de um rápido e efetivo monitoramento da presença de patógenos portadores desses genes de resistência, para que assim se possa prevenir a disseminação desses determinantes. Foram incluídos neste estudo 230 amostras únicas de Acinetobacter e Pseudomonas aeruginosa resistentes a imipenem detectados em pacientes internados em hospitais privados da cidade de São Paulo durante o período de fevereiro a outubro de 2013. As amostras foram avaliadas quanto à hidrólise de imipenem por espectrofotometria, quanto à presença de genes de carbapenemases por PCR e sequenciamento, e quanto à clonalidade por eletroforese em campos pulsados (PFGE) ou ERIC-PCR. Foram realizados ensaios de conjugação, transformação e sequenciamento completo de plasmídeos. Dentre as amostras de Acinetobacter spp. 80% (88) foram capazes de hidrolisar o imipenem. Dentre esses 76,1% (67) foram positivos para blaOXA-51-like, 19,3% (17) foram positivos para blaOXA-72. blaOXA-23, blaOXA-482 e blaIMP-1 foram detectados isoladamente em isolados distintos. O gene blaIMP-1 foi detectado em A. ursingii inserido em integron de classe 1 e representa a primeira descrição no Brasil. Uma nova carbapenemase OXA-482-like foi detectada em A. baumanii. Utilizando-se ERIC-PCR, observou-se uma grande diversidade de grupos clonais, com o máximo de quatro isolados por grupo. Dentre as amostras de P. aeruginosa, apenas 35,3% foram capazes de hidrolisar o imipenem. Dessas amostras, 14 possuíam o gene blaSPM-1, e isolados únicos possuíam, individualmente, os genes blaIMP, blaVIM, blaKPC-2 ou blaGES-23. O gene blaKPC-2 foi detectado inserido em contexto genético diferente dos descritos anteriormente, em plasmídeo IncU de 32 Kb, mobilizável, mas não conjugativo. Esta é a primeira descrição da sequencia completa de plasmídeo albergando o gene blaKPC-2 em P. aeruginosa no Brasil. Nas demais amostras (20) com atividade hidrolítica, não foram detectados genes de carbapenemase conhecidos, o que sugere a presença de genes de carbapenemase ainda não descritos. Em três amostras foi possível obter transformantes com plasmídeos, resistentes a carbapenêmicos. As amostras com blaSPM-1 apresentaram perfis de PFGE estreitamente relacionados. Em contraste, os perfis de PFGE das amostras com potenciais novas carbapenemases apresentaram índice de similaridade de Dice inferior ix a 80%, evidenciando grande diversidade clonal. Nossos achados evidenciam que a carbapenemase não intrínseca predominante em Acinetobacterem hospitais privados da cidade de São Paulo é OXA-72, e em hospitais privados há uma grande diversidade clonal. Em P. aeruginosa, a carbapenemase predominante é SPM-1, cuja disseminação é mediada por um único clone. Há potencialmente um número significativo de novas carbapenemases em Acinetobacter e P. aeruginosa, algumas delas mediadas por plasmídeos

Bacterial resistance to antibiotics is a serious and growing public health problem worldwide. The main and most efficient mechanism of resistance to ß-lactams in Gram-negative bacilli is the production of ß-lactamases, which have the ability to hydrolyze the ß-lactam ring and consequently inactivate this class of antibiotics. It is worth mentioning that currently ß-lactam antibiotics are the most used clinically, particularly in severe infections. Among the existing ß-lactamases, carbapenemases are capable of inactivating most ß-lactam antibiotics. A major concern is that these enzymes are mostly encoded by plasmids, which facilitates the spread of these resistance genes; therefore, it is of extreme importance to carry out a rapid and effective monitoring of the presence of pathogens bearing these resistance genes, in order to prevent the dissemination of these determinants. This study included 230 unique samples of imipenem-resistant Acinetobacterand Pseudomonas aeruginosa detected in patients hospitalized in private hospitals in the city of São Paulo during the period from February to October 2013. The samples were evaluated for the imipenem hydrolysis by spectrophotometry, the presence of carbapenemase genes by PCR and sequencing, and concerning clonality by pulsed field electrophoresis (PFGE) or ERIC-PCR. Conjugation, transformation and complete sequencing of plasmids were performed. Among Acinetobacter spp. samples, 80% (88) were able to hydrolyze imipenem. Among these, 76.1% (67) were positive for blaOXA-51-like genes and 19.3% (17) were positive for blaOXA-72. The blaOXA-23, blaOXA-482 and blaIMP-1 genes were detected alone in distinct isolates. The blaIMP-1 gene was detected in A. ursingii inserted in class 1 integron and represents the first description in Brazil. A novel OXA-482-like carbapenemase was detected in A. baumanii. Using ERIC-PCR, a great diversity of clonal groups was observed, with a maximum of four isolates per group. Among P. aeruginosa samples, only 35.3% were able to hydrolyze imipenem. Of these samples, 14 had the blaSPM-1 gene, and single isolates individually possessed the blaIMP, blaVIM, blaKPC-2 or blaGES-23 genes. The blaKPC-2 gene was found inserted in a genetic context different from those described previously, in a mobilizable, but not conjugative, 32 Kb IncU plasmid. This is the first description of the complete nucleotide sequence of a plasmid harboring the blaKPC-2 gene in P. aeruginosa in Brazil. In the remaining samples (20) with hydrolytic activity, no known carbapenemase genes were detected, suggesting the presence of carbapenemase genes not yet described. In three samples it was possible to obtain transformants with plasmids, resistant to carbapenems. Samples with blaSPM-1 showed closely related PFGE profiles. In contrast, the PFGE profiles of the samples with potential new carbapenemases showed Dice similarity index lower than 80%, evidencing a great clonal diversity. Our findings show that the predominant non-intrinsic carbapenemase in Acinetobacter in the city of São Paulo is OXA-72, and in private hospitals there is great clonal diversity. In P. aeruginosa, the predominant carbapenemase is SPM-1, the spread of this enzyme is mediated by a single clone. There are potentially a significant number of new carbapenemases in Acinetobacter and P. aeruginosa, some of them plasmid mediated

Estudo genotípico e fenotípico de bacilos Gram-negativos produtores de carbapenemase do tipo New Delhi metalo-ß-lactamase / Genotypic and fenotypic study of Gram-negative bacilli producers carbapenemase type New Delhi metallo--ß-lactamase

Os carbapenêmicos são os antimicrobianos mais amplamente utilizados no tratamento empírico de infecções graves por bacilos Gram-negativos. A pressão seletiva gerada pelo uso desses antimicrobianos ao longo das últimas três décadas contribuiu para a disseminação de enterobactérias e Gram-negativos não fermentadores produtores de carbapenemases, particularmente as do tipo KPC e NDM. Os genes que codificam essas enzimas usualmente estão localizados em plasmídeos e/ou transpósons. A hipótese atualmente mais aceita é que o gene blaNDM-1 seja uma quimera criada em Acinetobacter baumannii. A NDM-1 foi descrita em paciente proveniente da Índia e subsequentemente evidenciou-se sua ampla disseminação nesse país. A epidemiologia que tem sido observada nos casos detectados na Europa e Estados Unidos tem sido viagem à Índia, ou seja, sem casos autóctones. No Brasil, os primeiros casos foram identificados no Rio Grande do Sul, e a seguir no Rio de Janeiro e em São Paulo. Diferentemente dos casos da Europa e América do Norte, os casos do Brasil não tem relação epidemiológica com a Índia. O sequenciamento integral dos plasmídeos e cromossomos albergando o gene blaNDM permitirá entender como ocorre a disseminação desse mecanismo de resistência no Brasil. Para isso, foi avaliado o perfil de susceptibilidade dos isolados, bem como a capacidade conjugativa e clonalidade. Das vinte e oito amostras utilizadas neste trabalho, treze delas pertencem à espécie Enterobacter hormaechei, uma à espécie Citrobacter freundii, sete à espécie Escherichia coli, quatro à Klebsiella pneumoniae e três ao gênero Acinetobacter spp. Os primeiros isolados incluídos neste estudo (Escherichia coli e Enterobacter hormaechei produzindo NDM-1) foram isolados em agosto de 2013, de uma mesma amostra de swab retal de um paciente do Rio de Janeiro que nunca viajou para o exterior. O sequenciamento completo do DNA plasmidial utilizando a plataforma Illumina e a anotação de ambos os plasmídeos albergando o gene blaNDM-1 revelou que estes pertencem a grupos de incompatibilidade diferentes, IncFIIK (E. hormaechei) e IncX3 (E. coli), e abrigam um novo transpóson composto designado Tn3000. A comparação da sequência nucleotídica do Tn3000 com aquelas disponíveis no GenBank evidencia que a mesma estrutura está presente em plasmídeos de isolados da cidade de Porto Alegre e também em diferentes continentes. As espécies de Acinetobacter (A. radioresistens, A. ursingii e A. guillouiae) isoladas em São Paulo e Porto Alegre, possuem o gene blaNDM-1 albergados em um mesmo plasmídeo não tipável de 41.087 pb. A avaliação da clonalidade dos isolados de Enterobacter hormaechei "subsp. oharae" mostrou dois perfis diferentes através da técnica de PFGE, sendo que todos os microrganismos foram isolados de um surto no mesmo hospital no Rio de Janeiro. Isolados de Klebsiella pneumoniae de uma mesma paciente internada em hospital em Salvador, de sítios distintos - swab retal, hemocultura e urina, em ordem cronológica - obtiveram o mesmo perfil clonal pela técnica de PFGE. O mesmo ocorreu com três isolados de Escherichia coli, de um mesmo paciente do Rio de Janeiro, em amostras de swab retal. Os achados deste estudo evidenciam que no Brasil, Nepal, Marrocos e Índia há uma disseminação do gene blaNDM-1 mediada por um novo elemento móvel designado Tn3000 em enterobactérias. A detecção de um mesmo plasmídeo em diferentes espécies de Acinetobacter evidencia que neste gênero bacteriano, no Brasil, a disseminação do gene blaNDM-1 ocorre por conjugação.

Carbapenems are the antimicrobials most widely used in the empirical treatment of severe infections caused by Gram-negative bacilli. The selective pressure generated by the use of these antibiotics over the last three decades has contributed to the spread of enterobacteria and Gram-negative non-fermenting producing carbapenemases, mainly KPC and NDM. Genes encoding these enzymes are usually located in plasmids and/or transposons. Currently the most accepted hypothesis is that the blaNDM-1 gene is a chimera created in Acinetobacter baumannii. The NDM-1 was described in a patient from India and subsequently was reported to be broadly disseminate in this country. The epidemiology that has been observed in cases detected in Europe and United States is traveling to India, but no autochthonous cases. In Brazil, the first cases were identified in Rio Grande do Sul, and then in Rio de Janeiro and São Paulo. Differently from the cases described in Europe and North America, the cases from Brazil have no epidemiological link with India. The complete sequencing of plasmids and chromosomes harboring blaNDM gene will understanding how the dissemination of this resistance mechanism in Brazil occurs. In this work we will be evaluate the susceptibility profile of the isolates, and their conjugal capacity and clonality. Of the twenty-eight samples used in this study, thirteen of them belong to the species Enterobacter hormaechei, one to Citrobacter freundii, seven to Escherichia coli, four to Klebsiella pneumoniae and three to the genus Acinetobacter sp. The first two isolates included in this study (Escherichia coli and Enterobacter hormaechei) were isolated in August 2013, from the same rectal swab sample from a patient from Rio de Janeiro that never traveled abroad. Complete sequencing of plasmid DNA using Illumina platform and annotation of both plasmids harboring the blaNDM-1 gene revealed that they belong to different incompatibility groups, IncFIIK (E. hormaechei) and IncX3 (E. coli), and are harbor to a new transposon designated Tn3000. The comparison of the Tn3000 nucleotide sequence with those available at GenBank shows that the same structure is present in plasmids from other Porto Alegre and also in different continents. The Acinetobacter species (A. radioresistens, A. ursingii and A. guillouiae) isolated in São Paulo and Porto Alegre, have the blaNDM-1 gene harbored in a single non-typing plasmid of 41,087 bp. The evaluation of clonal relationship of Enterobacter hormaechei "subsp. oharae" showed two different profiles by PFGE technique; of note all microorganisms were isolated from an outbreak in the same hospital in Rio de Janeiro. Isolates of Klebsiella pneumoniae from a single patient hospitalized in Salvador, from different anatomical sites - rectal swab, blood culture and urine, in chronological order - obtained the same clonal profile by the PFGE technique. The same occurred with three Escherichia coli isolates, from the same patient from Rio de Janeiro, in swab rectal strains. Our findings suggest that in Brazil, Nepal, Morocco and India there is a spread of blaNDM-1 gene mediated by Tn3000 in enterobacteria. The detection of a same plasmid in different species of Acinetobacter shows that in this bacterial genus, in Brazil, the dissemination of the blaNDM-1 gene occurs by conjugation.

Infección por neisseria gonorrhoeaey fenotipos de resistencia antimicrobiana,Mar del Plata, 2005-2010 / Neisseria gonorrhoeae infection and phenotypes of antimicrobial resistance, Mar del Plata, 2005-2010 / Infecção por Neisseria gonorrhoeae e fenótipos de resistência antimicrobiana, Mar del Plata, 2005-2010

Se realizó un estudio epidemiológico de tipo descriptivo retrospectivo, para determinar la tasa de infección por Neisseria gonorrhoeae y sus fenotipos de resistencia a los antimicrobianos, en 666 pacientes adultos de ambos sexos que asistieron al servicio al Servicio de ITS del Instituto Nacional de Epidemiología "Dr. Juan H. Jara"- ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán", de la ciudad de Mar del Plata, entre los años 2005-2010. Para el diagnóstico de infección por N. gonorrhoeae, las muestras fueron obtenidas por hisopados endocervicales e hisopados uretrales a varones y luego cultivadas. Los aislamientos fueron remitidos al Laboratorio Nacional de Referencia en ITS para completar el estudio de sensibilidad antimicrobiana. Se obtuvo una tasa de infección por N. gonorrhoeae del 12,2% [IC 95%: 9,83-14,95]. Los fenotipos de resistencia más prevalentes resultaron QRNG/CMRNG (resistencia a quinolonas conjuntamente con resistencia cromosómica a penicilina y tetraciclina), QRNG (resistencia a quinolonas), PPNG (cepa productora de penicilinasa) y CMTR (resistencia cromosómica a tetraciclina). En el marco de la vigilancia epidemiológica de las infecciones producidas por N. gonorrhoeae, el rol del laboratorio consiste no sólo en monitorear la incidencia de casos en la población sino también el perfil de resistencia a los antibióticos de uso terapéutico, a fin de controlar la enfermedad.

An epidemiological retrospective descriptive study was conducted in order to determine the rate of Neisseria gonorrhoeae infection and the antimicrobial resistance phenotypes in 666 adult patients of both sexes who attended the Sexually Transmitted Disease Service, at the National Institute of Epidemiology "Dr. Juan H. Jara"- ANLIS city of Mar del Plata, between the years 2005- 2010. For the diagnosis of N. gonorrhoeae infection, samples were obtained by endocervical swabs and urethral swabs in men. Microbiological growth on selective culture medium was identified using carbohydrate utilization. N. gonorrhoeae isolates were subsequently submitted to the National Reference Laboratory in STI for the study of antimicrobial susceptibility by determining the minimum inhibitory concentration. The N. gonorrhoeae infection rate was 12.2% [CI 95%: 9.83-14.95]. The most prevalent resistance phenotypes were QRNG/CMRNG (quinolone resistance in addition to chromosomal resistance to penicillin and tetracycline), QRNG (resistance to quinolone), PPNG (penicillinase producing strain) and CMTR (chromosomal resistance to tetracycline). As part of the epidemiological surveillance of infections by N. gonorrhoeae, the role of the laboratory is not only to monitor the incidence of cases in the population but also the antibiotic resistance profile for therapeutic use, in order to control the disease.

Um estudo epidemiológico de tipo descritivo retrospectivo foi realizado para determinar a taxa de infecção por Neisseria gonorrhoeae e seus fenótipos de resistência aos antimicrobianos em 666 pacientes adultos de ambos os sexos que compareceram no Serviço de ITS do Instituto Nacional de Epidemiología "Dr. Juan H. Jara, ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán" da cidade de Mar del Plata, entre os anos de 2005-2010. Para o diagnóstico de infecção por N. gonorrhoeae, as amostras foram obtidas por esfregaços endocervicais e esfregaços uretrais em homens e em seguida cultivadas. Os isolados foram encaminhados para o Laboratório Nacional de Referência em ITS para completar o estudo da sensibilidade antimicrobiana. Uma taxa de infecção de 12,2% em N. gonorrhoeae [IC 95%: 9,83-14,95] foi obtida. Os fenótipos de resistência mais prevalentes foram QRNG/CMRNG (resistência às quinolonas em conjunto com a resistência cromossômica à penicilina e tetraciclina), QRNG (resistência a quinolonas), PPNG (cepa produtora de penicilinase) e CMTR (resistência cromossômica à tetraciclina). Sob o controle epidemiológico das infecções produzidas por N. gonorrhoeae, o papel do laboratório é não só monitorar a incidência de casos na população, mas também o perfil de resistência aos antibióticos de uso terapêutico, visando a controlar a doença.

Infección por Neisseria gonorrhoeae y fenotipos de resistencia antimicrobiana, Mar del Plata, 2005-2010 / Neisseria gonorrhoeae infection and phenotypes of antimicrobial resistance, Mar del Plata, 2005-2010 / InfecþÒo por Neisseria gonorrhoeae e fenótipos de resistÛncia antimicrobiana, Mar del Plata, 2005-2010

Se realizó un estudio epidemiológico de tipo descriptivo retrospectivo, para determinar la tasa de infección por Neisseria gonorrhoeae y sus fenotipos de resistencia a los antimicrobianos, en 666 pacientes adultos de ambos sexos que asistieron al servicio al Servicio de ITS del Instituto Nacional de Epidemiología "Dr. Juan H. Jara"- ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán", de la ciudad de Mar del Plata, entre los años 2005-2010. Para el diagnóstico de infección por N. gonorrhoeae, las muestras fueron obtenidas por hisopados endocervicales e hisopados uretrales a varones y luego cultivadas. Los aislamientos fueron remitidos al Laboratorio Nacional de Referencia en ITS para completar el estudio de sensibilidad antimicrobiana. Se obtuvo una tasa de infección por N. gonorrhoeae del 12,2% [IC 95%: 9,83-14,95]. Los fenotipos de resistencia más prevalentes resultaron QRNG/CMRNG (resistencia a quinolonas conjuntamente con resistencia cromosómica a penicilina y tetraciclina), QRNG (resistencia a quinolonas), PPNG (cepa productora de penicilinasa) y CMTR (resistencia cromosómica a tetraciclina). En el marco de la vigilancia epidemiológica de las infecciones producidas por N. gonorrhoeae, el rol del laboratorio consiste no sólo en monitorear la incidencia de casos en la población sino también el perfil de resistencia a los antibióticos de uso terapéutico, a fin de controlar la enfermedad.(AU)

An epidemiological retrospective descriptive study was conducted in order to determine the rate of Neisseria gonorrhoeae infection and the antimicrobial resistance phenotypes in 666 adult patients of both sexes who attended the Sexually Transmitted Disease Service, at the National Institute of Epidemiology "Dr. Juan H. Jara"- ANLIS city of Mar del Plata, between the years 2005- 2010. For the diagnosis of N. gonorrhoeae infection, samples were obtained by endocervical swabs and urethral swabs in men. Microbiological growth on selective culture medium was identified using carbohydrate utilization. N. gonorrhoeae isolates were subsequently submitted to the National Reference Laboratory in STI for the study of antimicrobial susceptibility by determining the minimum inhibitory concentration. The N. gonorrhoeae infection rate was 12.2% [CI 95%: 9.83-14.95]. The most prevalent resistance phenotypes were QRNG/CMRNG (quinolone resistance in addition to chromosomal resistance to penicillin and tetracycline), QRNG (resistance to quinolone), PPNG (penicillinase producing strain) and CMTR (chromosomal resistance to tetracycline). As part of the epidemiological surveillance of infections by N. gonorrhoeae, the role of the laboratory is not only to monitor the incidence of cases in the population but also the antibiotic resistance profile for therapeutic use, in order to control the disease.(AU)

Um estudo epidemiológico de tipo descritivo retrospectivo foi realizado para determinar a taxa de infecþÒo por Neisseria gonorrhoeae e seus fenótipos de resistÛncia aos antimicrobianos em 666 pacientes adultos de ambos os sexos que compareceram no Serviþo de ITS do Instituto Nacional de Epidemiología "Dr. Juan H. Jara, ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán" da cidade de Mar del Plata, entre os anos de 2005-2010. Para o diagnóstico de infecþÒo por N. gonorrhoeae, as amostras foram obtidas por esfregaþos endocervicais e esfregaþos uretrais em homens e em seguida cultivadas. Os isolados foram encaminhados para o Laboratório Nacional de ReferÛncia em ITS para completar o estudo da sensibilidade antimicrobiana. Uma taxa de infecþÒo de 12,2% em N. gonorrhoeae [IC 95%: 9,83-14,95] foi obtida. Os fenótipos de resistÛncia mais prevalentes foram QRNG/CMRNG (resistÛncia Os quinolonas em conjunto com a resistÛncia cromoss¶mica O penicilina e tetraciclina), QRNG (resistÛncia a quinolonas), PPNG (cepa produtora de penicilinase) e CMTR (resistÛncia cromoss¶mica O tetraciclina). Sob o controle epidemiológico das infecþ§es produzidas por N. gonorrhoeae, o papel do laboratório é nÒo só monitorar a incidÛncia de casos na populaþÒo, mas também o perfil de resistÛncia aos antibióticos de uso terapÛutico, visando a controlar a doenþa.(AU)

Pesquisa de genes de resistência a quinolonas em bacilos Gram negativos de origem clínica e ambiental / Research for genes of quinolone resistance in Gram negative bacilli from clinical and environmental origin

Introdução. Quinolonas são antimicrobianos sintéticos que inibem as enzimas DNA-girase e topoisomerase IV resultando na morte bacteriana. São altamente eficazes no tratamento de infecções bacterianas, especialmente causadas por bactérias Gram negativas, e portanto amplamente utilizados na medicina humana e veterinária, na qual também são empregados como profiláticos. Porém, o uso indiscriminado e inadequado levou ao aumento de bactérias resistentes a estes compostos. Esta resistência pode ocorrer devido a mutações nas enzimas DNA-girase e topoisomerase IV, e também por genes contidos em plasmídeos. Estes últimos são os principais responsáveis pela disseminação e circulação da resistência entre o meio ambiente e o ambiente hospitalar. Objetivos. Pesquisar genes de resistência a antimicrobianos do grupo das quinolonas em bactérias Gram negativas de origem clínica e ambiental que apresentam resistência fenotípica a este grupo. Material e Métodos. 73 cepas de Enterobacteriaceae e Aeromonas sp. de origem clínica e ambiental foram selecionadas para o estudo, e avaliadas quanto à sensibilidade aos antimicrobianos do grupo das quinolonas e à pesquisa de genes de resistência a este mesmo grupo e mutações no gene que codifica a enzima DNA-girase por meio de PCR e sequenciamento. Resultados. Das 73 cepas previamente selecionadas para compor o estudo, 65 foram utilizadas, devido à exclusão de perfis clonais similares. Nestas, foram observados os genes, qnrS1 (1,5 por cento ), qnrS2 (26,2 por cento ), qnrB1 (3,1 por cento ), qnrB19 (12,3 por cento ), qnrD1 (1,5 por cento ), aac(6)-Ib-cr (10,8 por cento ), oqxA (43,1 por cento ) e oqxB (41,5 por cento ), e duas variantes determinadas qnrB-like (3,1 por cento ) e qnrB69-like (1,5 por cento ). Os genes qnrA, qnrC e qepA não foram identificados. Mutações na enzima DNA-girase foram observadas em 97,9 por cento das cepas positivas para algum dos genes pesquisados...

Introduction. Quinolones are synthetic antimicrobial agents that inhibit DNA gyrase and topoisomerase IV enzymes resulting in bacterial death. They are highly effective in the treatment of bacterial infections, especially the ones caused by Gram negative bacteria, as well as for prophylaxy. Therefore they are widely used in human and veterinary medicine. However, indiscriminate and improper use led to an increase of bacteria resistance to these compounds. This resistance can be due to mutations in DNA gyrase and topoisomerase IV enzymes and also by genes contained in plasmids, which are mainly responsible for the spread and transmission of resistance between the environment and the hospital set. Objectives. To search for genes of resistance to quinolone antimicrobial agents in Gram-negative bacteria from clinical and environmental strains that present phenotypic resistance to this group. Material and Methods. 73 strains of Enterobacteriaceae and Aeromonas spp., from clinical and environmental origin, were selected for this study, and evaluated for antimicrobial susceptibility of quinolone and search of resistance genes in this same group and also for mutations in the gene encoding the enzyme DNA gyrase by PCR and sequencing. Results. Of the 73 strains previously selected to compose this study, 65 were used, due to the exclusion of similar clonal profiles. In these, genes qnrS1 (1.5 per cent ), qnrS2 (26.2 per cent ) qnrB1 (3.1 per cent ), qnrB19 (12.3 per cent ) qnrD1 (1.5 per cent ) aac(6')-Ib-cr (10.8 per cent ) oqxA (43.1 per cent ) and oqxB (41.5 per cent ) were observed, and two variants were named as qnrB-like (3.1 per cent ) and qnrB69-like (1.5 per cent ). The qnrA, qnrC and qepA genes were not identified. Mutations in DNA gyrase enzyme were observed in 97.9 per cent of the positive strains for at least one of the genes studied. It was possible to establish the association of aac(6')-Ib-cr with class 1 integron gene in four strains...

Avaliação da atividade antimicrobiana e efeitos biológicos de riparinas sobre eliminação de resistência a drogas em amostras de Staphylococcus aureus / Evaluation of the antimicrobial activity and biological effect by riparins about elimination the resistance of drugs in samples of Staphylococcus aureus

Linhagens de Staphylococcus aureus (319U e 122U) de origem bovina com padrões de resistência plasmidial a drogas previamente conhecidos foram submetidas ao tratametno com três riparinas constituintes de Aniba riparia (Ness), Mez (Lauraceae), planta típica da região amazônica com atividade antimicrobiana comprovada contra S. aureus. O objetivo foi avaliar o efeito dessas substâncias sobre a curva de morte bacteriana e sua influência sobre a eliminação de plamídeos de resistência a drogas. Os estudos foram realizados com éteres metilicos de N-benzoiltiramina (riparina I), N (2 hidroxibenzoil)-tiramina(riparina II) e N-(2,6 dihidroxibenzoil)-tiramina (riparina III), obtidos da A riparia. A riparina III apresentou atividade curagênica, eliminando marca de resistência para penicilina na linhagem 319U numa frequência de 61,7%. Nessa linhagem também foi evidenciada a perda da capacidade de expressar a enzima coagulase. A atividade antiplasmidial e a capacidade de modificar a expressão de fatores de virulência da riparina III mostram a importância desse estudo como contribuição para prevenção de linhagens de S, aureus multiresistentes, podendo aumentar a sensibilidade dessas linhagens a outros agentes antimicrobianos.

Virulence factors and antimicrobial resistance of Escherichia coli isolated from urinary tract of swine in southern of Brazil / Fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos de Escherichia coli isoladas do trato urinário de suínos do Sul do Brasil

The present study determined the molecular and resistance patterns of E. coli isolates from urinary tract of swine in Southern of Brazil. Molecular characterization of urinary vesicle samples was performed by PCR detection of virulence factors from ETEC, STEC and UPEC. From a total of 82 E. coli isolates, 34 (38.63 percent) harbored one or more virulence factors. The frequency of virulence factors genes detected by PCR were: pap (10.97 percent), hlyA (10.97 percent), iha (9.75 percent), lt (8.53 percent), sta (7.31 percent) sfa (6.09 percent), f4 (4.87 percent), f5 (4.87 percent), stb (4.87 percent), f6 (1.21 percent) and f41 (1.21 percent). Isolates were resistant to penicillin (95.12 percent), lincomycin (93.9 percent), erythromycin (92.68 percent), tetracycline (90.24 percent), amoxicillin (82.92 percent), ampicillin (74.39 percent), josamycin (79.26 percent), norfloxacin (58.53 percent), enrofloxacin (57.31 percent), gentamicin (39.02 percent), neomycin (37.8 percent), apramycin (30.48 percent), colistine (30.48 percent) and cefalexin (6.09 percent). A number of 32 (39.02 percent) E. coli isolates harbored plasmids.

O presente estudo teve por objetivo determinar os padrões moleculares e de resistência aos antimicrobianos de isolados de E. coli provenientes do trato urinário de suínos no Sul do Brasil. Os fatores estudados dividiram os patotipos ETEC, STEC e UPEC. Trinta e quatro (38,63 por cento) isolados avaliados apresentavam um ou mais dos fatores de virulência pesquisados. A freqüência dos genes de virulência detectados foram: pap (10,97 por cento), hlyA (10,97 por cento), iha (9,75 por cento), lt (8,53 por cento), sta (7,31 por cento) sfa (6,09 por cento), f4 (4,87 por cento), f5 (4,87 por cento), stb (4,87 por cento), f6 (1,21 por cento) e f41 (1,21 por cento). Os isolados foram resistentes à penicilina (95,12 por cento), lincomicina (93,9 por cento), eritromicina (92,68 por cento), tetraciclina (90,24 por cento), amoxacilina (82,92 por cento), ampicilina (74,39 por cento), josamicina (79,26 por cento), norfloxacina (58,53 por cento), enrofloxacina (57,31 por cento), gentamicina (39,02 por cento), neomicina (37,8 por cento), apramicina (30,48 por cento), colistina (30,48 por cento) e cefalexina (6,09 por cento). Trinta e dois (39,02 por cento) isolados de E. coli continham plasmídeos.